一种从热带木本植物中无毒组织研磨提取核酸的方法

发表时间：2019/12/19

木本热带植物中含有大量复杂的有机化合物，这些有机化合物会抑制提取RNA或DNA所需的化学程序，从而不利于后续研究及应用，如RNA测序和基因表达分析。为了克服这个问题，研究人员必须使用CTAB / PVP缓冲液的提取方案，而不能使用市售的DNA / RNA提取试剂盒。但是，这种提取方式耗时长、需使用有毒化学品（例如苯酚和CHCl₃），并且一次只能处理少量样品。为了克服这些问题，我们开发了一种基于CTAB / PVP的新方法，用于RNA或DNA提取，去掉了传统方法中的苯酚/CHCl₃步骤。此外，该方法同样适用于96孔深孔板，使用SPEX高通量组织研磨仪，一次研磨6块深孔板，同时处理576个样品，大大加快了处理速度。

我们的新方法，能够从夏威夷果、牛油果和芒果组织中，成功提取RNA，这些组织使用传统方法很难提取到RNA。而后我们还验证了，该方法提取的RNA成功地合成cDNA，以进行实时定量PCR并生成高质量的RNA-Seq库。该方法经轻微改动后，可用于从不同的热带和亚热带树种中快速提取DNA。